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關(guān)于安捷倫液相色譜柱的這些問題,相信您也問到過

更新時(shí)間:2021-03-18  |  點(diǎn)擊率:2263
   關(guān)于安捷倫液相色譜柱的這些問題,相信您也問到過
  安捷倫液相色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行的。
  較長的色譜柱組分保留較強(qiáng),運(yùn)行時(shí)間較長,柱效更高,分離度效果更好。在實(shí)際工作中應(yīng)綜合衡量運(yùn)行時(shí)間和柱效,選擇長度適宜的色譜柱。例如含量測(cè)定、溶出檢測(cè)對(duì)于分離的要求較低,可選用較短的色譜柱,減少運(yùn)行時(shí)間;有關(guān)物質(zhì)一般選擇較長的色譜柱,提高分離效果。
  使用安捷倫液相色譜柱的常見問題有哪些?
  1、對(duì)于一根常用的C18柱,拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)?為什么要這樣做?
  答:新柱活化,實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程,除了用流動(dòng)相平衡外,有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡,特別是測(cè)定分子量比較高的多肽,尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子,擴(kuò)散速度慢,平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單,多進(jìn)幾次樣品,直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定,再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。
  如果要加快平衡時(shí)間,把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。
  2、測(cè)定多肽,一般采用什么柱子?流動(dòng)相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽,應(yīng)該怎么選擇柱子?
  答:分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
  3、安捷倫液相色譜柱在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來也討論過這個(gè)問題,我也拆下來清洗過,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了,但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢?
  答:柱頭污染了,就取出污染的,再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍希敲次⒂^的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,僅表面,可能就是一些臟物,所以,問題解決。但是今后還會(huì)有同樣問題,再掛,那么不小心刮,影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。
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